在常溫下由化學反應產生的光，產生電子能級處于激發態的物質，后者通過躍遷釋放能量產生光子，從而導至的發光現象。化學發光是一個多步驟的過程。

　　學發光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學發光技術與高特異性的免疫反應結合起來建立的微量測定技術，因此該技術靈敏度高、線性范圍寬、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，操作簡便、反應快速、無放射污染，儀器簡單穩定且可以實現自動化。

　　化學發光免疫分析包含免疫分析系統和化學發光分析系統。

　　免疫分析系統是指：抗原抗體標記化學發光物質或酶，經過抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物。

　　化學發光分析系統是指在免疫反應結束后，利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發態的中間體，這種激發態中間體回到穩定的基態時，同時發射出光子，利用發光信號測量儀進行檢測。根據化學發光標記物與發光強度的關系，可利用標準曲線計算出被測物的含量。

　　ECL化學發光法是目前常用、靈敏的WesternBlot檢測方法。由于這些底物不會在膜表面沉淀、牢牢結合在膜上，因此可以通過一抗二抗去除液(Strippingbuffer)將親和結合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結合的抗體，也要足夠溫和使轉移的目標蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通過使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE膠相比，不僅省時省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強。